技術(shù)文章

常規(guī)組織樣本核酸（DNA/RNA）提取純化

QIAamp DNA Kits 
—— 純化基因組 DNA、線粒體 DNA、**、寄生蟲或病毒DNA

  1. 20 分鐘內(nèi)快速純化高品質(zhì)，高產(chǎn)量，即用型 DNA（見圖 20）
  2. 多種規(guī)格可選擇：Mini Kit 可處理 25 mg 組織，Micro Kit 可處理小于 10 mg 組織
  3. 完全去除污染物和抑制劑
  4. 可在 QIAcube 上進(jìn)行自動(dòng)化純化

表1 QIAamp DNA Mini Kit純化各類樣本的核酸產(chǎn)量

樣品

用量

總核酸的量（μg）*

DNA 的量（μg）?

血液

200 μl

4–12

4–12

白膜層

200 μl

25–50

25–50

細(xì)胞

106

20–30

15–20

肝臟

25 mg

60–115

10–30

大腦

25 mg

35–60

15–30

肺

25 mg

25–45

5–10

心臟

25 mg

15–40

5–10

腎臟

25 mg

40–85

15–30

脾臟

10 mg

25–45

5–30


* 核酸未經(jīng)RNase處理 。
? 核酸經(jīng)RNase處理?？偤怂岬牧浚é蘥）*


圖1 純化長(zhǎng)達(dá)50 kb的基因組DNA
QIAamp Kits從圖示來(lái)源的樣本（每泳道3 μg）中純化獲得的DNA長(zhǎng)度



RNeasy Kit —— 常規(guī)組織或細(xì)胞 RNA 純化

  1. 從細(xì)胞、組織或酵母中純化至總 RNA
  2. 數(shù)分鐘內(nèi)快速純化得到高品質(zhì)總 RNA
  3. 即用型 RNA 在各種下游應(yīng)用中表現(xiàn)良好
  4. 無(wú)需有機(jī)試劑或乙醇沉淀步驟

RNeasy Kits 四種規(guī)格（Micro, Mini, Midi, Maxi），RNeasy 離心柱的結(jié)合能力分別為45 μg, 100 μg, 1 mg 和 6 mg 的 RNA。

表2 RNeasy Mini Kit從各類樣本中純化得到的總RNA產(chǎn)量

樣本來(lái)源

起始材料

平均產(chǎn)量（μg）

動(dòng)物細(xì)胞
LMH
HeLa
COS-7
**細(xì)胞（未受激）


1 x 106
1 x 106
1 x 106
1 x 106


12
15
35
0.5

小鼠組織
肝
肺
脾


10 mg
10 mg
10 mg


40
10
35

**細(xì)胞
S. cerevisiae


1 x 107


25


圖2 從多種樣本中純化高品質(zhì)RNA。


使用RNeasy Maxi Kit純化的總RNA的甲醛瓊脂糖凝膠電泳和northern印跡。從各種來(lái)源的樣本中分離總RNA（10 μg）上樣至各泳道。所有組織均來(lái)源于小鼠。酵母：Saccharomyces cerevisiae；E. coli菌株：HB101。32P標(biāo)記的探針識(shí)別的（G）GAPDH；（E）翻譯延長(zhǎng)因子EF-1α；和（O）外膜蛋白A序列。（E和O分別由瑞士巴塞爾大學(xué)的P. Philippsen和德國(guó)蒂賓根馬克斯-普朗克生物學(xué)研究所的U. Henning。）B. subtilis未采用探針檢測(cè)。M：0.24–9.5 kb RNA分子量標(biāo)準(zhǔn)。胚胎、Huh7和HeLa細(xì)胞泳道中的7.5 kb條帶（圖示）為核前體RNA。

表3 常規(guī)組織，細(xì)胞核酸純化產(chǎn)品列表：


產(chǎn)品名稱

貨號(hào)

QIAamp DNA Mini Kit (50)

51304

QIAamp DSP DNA Mini Kit (50)

61304

RNeasy Mini Kit (50)

74104

RNeasy Mini Kit (250)

74106

RNeasy Plus Mini Kit (50)

74134

RNeasy Plus Universal Midi Kit (10)

73442

RNeasy Midi Kit (10)

75142

RNeasy Midi Kit (50)

75144

RNeasy Maxi Kit (12)

75162

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